会的审查后,通过和方法对去识别化样本进行了测序。收集协议。在所有情况下,样本都是在手术现场连续选择的,以避免采样偏差,并且所有样本在进行测序之前都经过去识别化处理。如果有的话,会随样本提供去识别化的相关临床数据,尽管在样本基因分型之前研究人员无法获得这些数据。排除既往有涉及内脏器官部位肿瘤病史的患者,以避免纳入转移瘤。
排序通过传统测序,对从肺细胞系和患者
样本获得的基因组进行测序。在发现组中,使用个患者样本和匹配的正常对个基因进行测序,其中包括个激酶。所有突变均被证实为体细胞突变。使用自动突变识别器识别突变,然后通过与所有原发性肿瘤样本中匹配的正常序列进行比较来手动验证突变。在二次筛选中,使用另外个患者样本和个细胞系对初次筛选中确定的种突变酪氨酸激酶(、俄罗斯电话号码列表、、、和)进行测序。在验证屏幕中,总共个样本接受了测序基因。在除之外的所有情况下,都可使用匹配的正常来验证突变是否为体细胞。
细胞培养、、和细胞获自癌症研究所的核
心保藏中心,之前购自美国典 销售线索 型培养物保藏中心并用于建立早期传代肺细胞保藏中心通过指纹图谱和单核苷酸多态性阵列分析的癌细胞系()。本文所述实验中使用的所有细胞均来自当时的冷冻细胞,未进行进一步验证。肺癌细胞系在含有胎牛血清的中生长,细胞在含有牛血清的改良培养基中生长,细胞在补充有牛血清的中生长。牛血清和的。对于撤除实验,通过离心收集细胞,在无菌中洗涤一次,然后重悬于不含的培养基中。在孔板中进行细胞的集落形成测定,其中将个细胞