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朝上放置在精密混合器对准工具

 麦迪逊,威斯康星州)中来制备。将混合器卡入顶部,并移除粘合垫圈。关闭,同时将混频器与阵列对齐。将阵列置于杂交系统(,麦迪逊,威斯康星州)中,并使用带有吸头的移液器(吉尔森,米德尔顿,威斯康星州),将μ杂交溶液装入填充口。装载后,用干净的纸巾除去填充口和排气口处暴露的样品。然后用端口密封件封闭两个端口(,麦迪逊,威斯康星州)。

然后关闭杂交室夹具,将混合面板设置为混合

模式,杂交后,将阵列混合器拆卸到含有预热洗涤缓冲液°的储存器中,然后进行后续洗涤,以尽​​量减少非特异性残留。这些洗涤包括:将预热至°,以每秒次翻转的速度翻尼泊尔电话号码表转洗涤管次,使用预加热连续两次洗涤加热至°,以每秒次翻转的速率翻转次,并在°下孵育分钟,在室温下,以次翻转的速率翻转分钟在室温下,以每秒次反转的速率反转分钟,以及在室温下,然后将阵列置于洗脱系统(,麦迪逊,威斯康星州)中,并用洗脱室(,麦迪逊,威斯康星州)覆盖。通过添加μ氢氧化钠并在室温下孵育分钟,从探针阵列中释放捕

获的文库片段将洗脱液从洗脱室中移出

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通过将材料分入两管(约μ)中进行中 销售线索 和,其中含有μ乙酸的μ缓冲液(,,),最后使用进行纯化柱(,日耳曼敦,马里兰州)。捕获的在–––根据肿瘤和正常中每个预测变体位置的等位基因频率和读数支持参考和变体等位基因,将每个假定的体细胞事件分类为参考(野生型)、种系、体细胞或(科博尔特等人,),仅保留体细胞突变用于下游分析。这些经过验证的体细胞突变被进一步过滤,以消除由链特异性伪影、读段位置伪影或映射不良的读段支持的假阳性。

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