底部琼脂上。周后，使用软件对菌落进行计数。向量全长从获得，并在通过添加端标签后克隆到逆转录病毒载体和的位点中。使用定点诱变试剂盒通过定点诱变产生突变体。所有突变均通过测序验证。的慢病毒载体获自的。对应于克隆，其发夹序列靶向的。对应于克隆，其发夹序列靶向的编码序列。载体中提供了两个发夹。发夹靶向也从获得并用作对照。病毒感染如先前所描述的
使用载体的逆转录病毒转导，转基因在肺
癌细胞系和中表达。简言之，细胞用于产生病毒并用合适的或载体和使用的包装载体共转染。在聚凝胺存在下对细胞进行两轮过夜感染。使用μ的杀稻瘟菌素选择、和生成稳定细胞；和为μ；波兰电话号码表为μ。慢病毒感染按照在线协议进行（），用建议的、和载体组合转染细胞。收集病毒并用于在聚凝胺存在下感染肺癌细胞系小时。使用嘌呤霉素选择产生稳定的细胞系，的浓度为μ，、和的浓度为μ。细胞增殖和活力测定根据制造商的说明，使用试剂测量细胞增殖。对于细胞系实验，将细胞以每孔个细胞的密度接种在透明底孔板中。
第二天添加药物，天后测量系的细胞增殖
对于，细胞以每孔个细胞铺板 销售线索 ，并于当天添加药物。天后测量增殖。使用标准孔板发光计读板器进行增殖测量。数据显示为相对值，其中给定药物浓度下的发光与相同类型的未处理细胞的发光进行比较。激酶抑制剂购自实验室或在哈佛医学院实验室合成。通过进行的时间分辨激酶活性测定，确定了所有化合物对的体外。使用读数器对细胞进行台盼蓝染色，并为每个测量样品生成个独立图像，从而测量细胞活力。根据制造商的方案添加药物小时后，对经达沙替尼处理的
